====== Note pour culture en pétri avec anaérobie facultative ====== > Est anaérobie facultatif un organisme capable de se développer en présence (milieu aérobie) ou en l'absence d'oxygène moléculaire (O2, milieu anaérobie) en anaérobiose. > Par exemple, pour l'azote, les bactéries du cycle de l'azote comme les Pseudomonas sont de nature anaérobie facultative. Chaque bactérie fonctionne alors comme une bactérie anaérobie facultative, en anaérobiose facultative. ===== L'équipement ===== * Bouteille de de 2L, vide et propre * Ballon en latex avec un col suffisamment large pour s'étendre sur la bouche de la bouteille et suffisamment élastique pour enserrer le goulot * Entonnoir, cuillère ou petite spatule de laboratoire * Vinaigre * Bicarbonate de soude * Sac à fermeture zip ou sacs de congélation de la taille minimum d'une demie feuille A4 * Clam circulaire ou collier de serrage * Boîte de Pétri, déjà chargée d'agar et inoculée avec votre échantillon * Incubateur ===== Comment faire ===== - Versez entre 250 et 500 ml de vinaigre dans la bouteille. - Remplissez le ballon en latex à moitié de bicarbonate de soude. //Vous pouvez faire en enfonçant le col de l'entonnoir dans le ballon et en versant du bicarbonate de soude (vous devrez peut-être l'enfoncer avec un stylo ou (car il est agglutiné), ou de verser du bicarbonate de soude avec la cuillère/spatule et en la poussant dans le ballon (attention au risque de versement en dehors du réservoir).// - Étendez le col du ballon sur le goulot de la bouteille de manière à ce que vous obteniez une bonne étanchéité. - Tenez le corps du ballon à la verticale puis renverser tout le bicarbonate de soude dans la bouteille. Le vinaigre et le bicarbonate de soude réagissent le ballon se remplira de CO2 - Fixez le col du ballon avec le serre-joint ou un clamp, aussi bas que possible de l'embouchure du ballon pour un verrouillage sécruisé. Laissez le la bouteille pour l'instant. - Mettez votre boîte de pétri dans le sachet ziplock, à l'envers, et mettez le tout sur une surface plane. Aplatissez le sachet autant que possible pour le vide de son air ambiant. - Fermez le sachet à l'exception d'une petite ouverture, juste large assez pour admettre le col du ballon. - Détacher le ballon gonflé de la bouteille, en prenant soin de le garder bien serrée pour conserver le CO2 - Insérez l'embouchure du ballon aussi loin que possible dans le sachet ziplock. - Retirez soigneusement la pince du ballon. **Pas totalement ni brusquement pour éviter un un gros coup de souffle**. Tenez le ballon dans une main et gardez votre l'autre main sur le sachet pour que le gaz ne les sépare pas. - Lorsque le sachet est complètement gonflé, faites glisser rapidement le ballon et fermer la petite ouverture du sachet. Assurez-vous que le sachet est entièrement scellée. - Veillez à transporter le sachet par en dessous afin que la boîte pétri ne s'ouvre pas par accident, placez-le dans votre incubateur.